轉基因動物是指將外源重組基因轉染并整合到動物受體細胞基因組中，從而形成在體內(nèi)表達外源基因的動物，現(xiàn)如今我國對轉基因動物的研究也在不斷深入。本文就是一篇濕地科學與管理期刊投稿的論文范文，主要論述了小鼠MCK基因啟動子的克隆及其活性初步分析。

　　摘要：本研究克隆了小鼠MCK基因5′側翼區(qū)以及核心啟動子區(qū)，并分析和研究了其調(diào)控活性。首先以小鼠尾部肌肉基因組DNA為模版克隆了小鼠MCK基因5′側翼區(qū)序列，回收純化，連接pEASY-T3 Cloning載體，測序，分析了其增強子與核心啟動子序列。然后將核心啟動子序列亞克隆到無啟動子的熒光蛋白報告載體pGL3-Venus中，轉染小鼠成肌細胞C2C12，觀察其在熒光顯微鏡下的表達情況。結果表明，小鼠MCK基因-1354 ～ +1 bp核心啟動子序列能調(diào)控Venus熒光蛋白在C2C12細胞內(nèi)表達，證實MCK啟動子核心序列具有組織特異性調(diào)控能力。

　　關鍵詞：小鼠,MCK基因,啟動子,序列分析

　　在轉基因動物研究中，外源基因都需要在某種組織中特異性表達，因此，組織特異性啟動子對于外源基因組織特異性表達具有重要作用。另外，組織特異性啟動子是研究細胞分化、基因工程以及再生醫(yī)學應用中的重要工具。據(jù)報道，由肌肉特異性調(diào)控元件構成的啟動子能夠指導載體進行肌肉特異性表達，在非肌肉細胞中表達很低[1]，這些調(diào)控元件包括肌酸激酶(Creatine Kinase， CK)調(diào)控元件[2]、骨骼肌肌動蛋白調(diào)控元件[3]、肌球蛋白重鏈調(diào)控元件[4]和其他肌肉基因的調(diào)控元件。高等脊椎動物肌酸激酶存在胞質(zhì)型和線粒體型兩大類，其中胞質(zhì)型包括肌肉型肌酸激酶(Muscle Creatine Kinase， MCK)和腦型肌酸激酶(Brain Creatine Kinase， BCK)兩種形式，而在線粒體中存在CKmt1和CKmt2兩種類型的肌酸激酶[5]。肌肉肌酸激酶基因主要存在于各種肌肉細胞中，骨骼肌和心肌中都含有肌酸激酶，尤其骨骼肌含量最為豐富，占全身總量的96%，在收縮肌肉中被轉錄激活，在成年心肌和骨骼肌中高度表達[6]。

　　目前，外源基因在肌肉中表達主要應用巨細胞病毒(Cytomegaoviyns， CMV)啟動子，CMV啟動子雖然高效，但外源基因表達沒有細胞特異性[7]，因此，在轉基因動物的應用中受到極大地限制。考慮到轉基因動物后期應用的生物安全評價，所以選取更適合自然界存在的肌肉特異性啟動子顯得極為重要。在研究相關基因在肌肉發(fā)育過程中的作用及對肌肉形成的影響，特別是在肉用方面的轉基因動物的研究與應用中及肌肉性疾病治療性研究中，肌肉特異性啟動子的研究就成了熱點。

　　本研究首先克隆了小鼠MCK 5′側翼區(qū)序列，并分析了其核心啟動子/增強子區(qū)，然后克隆了小鼠的MCK核心啟動子，將其連接到帶有熒光蛋白的報告載體中，轉染肌肉細胞驗證其具有轉錄活性，為進一步研究MCK啟動子在轉基因動物和再生醫(yī)學中的應用奠定了基礎。

　　相關期刊簡介：《濕地科學與管理》[1]是林業(yè)基礎性和高科技學術期刊，創(chuàng)刊于1992年。幾十年來，以刊登代表我國林業(yè)科學研究水平的最新研究成果為己任，在不同的歷史時期，配合黨和國家的大政方針以及林業(yè)中心工作，刊載了大量的研究論文，在國內(nèi)外林業(yè)學術交流中起到了重要的作用，并逐漸形成了自己專業(yè)面廣，學術水平高，審稿客觀公正，講求學術民主，倡導百家爭鳴的特點。