摘 要: 納米藥物載體因其良好的生物相容性、組織滲透性、無(wú)毒、易吸收等特性，得到廣泛應(yīng)用。藥物載體進(jìn)入靶向部位發(fā)揮作用需要以內(nèi)吞方式進(jìn)入細(xì)胞，在此過(guò)程中，內(nèi)體的屏障作用是限制其發(fā)揮藥效的重要因素。從逃逸機(jī)制出發(fā)，總結(jié)了逃逸劑通過(guò)質(zhì)子化效應(yīng)、膜融合或膜孔形成、膜破壞及屏蔽免疫等方式實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸。綜述了以聚合物材料、多肽、光化學(xué)試劑、pH 敏感材料等為逃逸劑，對(duì)載體材料進(jìn)行修飾，實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸的方法，最后對(duì)載體內(nèi)體逃逸的發(fā)展進(jìn)行了展望。

　　關(guān)鍵詞: 藥物載體; 內(nèi)體逃逸; 質(zhì)子化; 光化學(xué)內(nèi)化; 結(jié)構(gòu)修飾

　　1 前 言

　　納米載體作為一種亞微粒輸送系統(tǒng)，能大大提高藥物的吸收度和穩(wěn)定性，改善藥物性質(zhì)和靶向性，加快基因轉(zhuǎn)染速率，延長(zhǎng)作用時(shí)間，增加療效，已廣泛應(yīng)用于腫瘤、血管疾病的治療[1，2]。目前廣泛應(yīng)用的納米載體主要包括膠束、脂質(zhì)體、樹(shù)枝狀大分子、聚合物納米顆粒等[1，3，4]，其包載藥物進(jìn)入機(jī)體，通過(guò)調(diào)節(jié)載體的表面電荷、粒徑大小或與相應(yīng)配體結(jié)合等方式突破細(xì)胞膜[5，6]; 在跨膜過(guò)程中形成內(nèi)涵體，隨著內(nèi)涵體被溶酶體內(nèi)吞，進(jìn)入到溶酶體[3，4，7]。一般載體會(huì)因?yàn)樵趦?nèi)體中的長(zhǎng)時(shí)間停留，由于內(nèi)涵體/溶酶體內(nèi)酸性環(huán)境( pH 約 4. 0～6. 0) 及大量酶的存在導(dǎo)致載體水解，造成包載物質(zhì)的滲漏，改變其結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性，嚴(yán)重影響所包載藥物的治療效果[8，9]，如圖 1 所示。因此，針對(duì)內(nèi)體逃逸的機(jī)制，研究人員對(duì)藥物載體材料進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，從而達(dá)到內(nèi)體 逃 逸 的 目 的，提 高 藥 物 療 效， 降 低 藥 物 毒 副作用[10]。

　　2 藥物載體內(nèi)體逃逸的方式

　　藥物載體經(jīng)過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，由于內(nèi)吞胞質(zhì)的 pH 值從早期內(nèi)涵體( pH 5. 5 ～ 6. 5) 到晚期內(nèi)涵體( pH 4. 5 ～ 5. 5) ，最后 到 溶 酶 體( pH < 5) ，呈現(xiàn)出逐漸降低的過(guò)程[11]，因此，藥物載體可通過(guò)與內(nèi)體逃逸劑結(jié)合實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸。常用內(nèi)體逃逸劑如表 1 所示。

　　2. 1 利用質(zhì)子化效應(yīng)脹破內(nèi)體膜

　　質(zhì)子化效應(yīng)是通過(guò)具有高緩沖能力的質(zhì)子化劑介導(dǎo)，在質(zhì)子化時(shí)，能夠自由膨脹，使得內(nèi)體內(nèi)滲透壓升高，引起大量的水和離子內(nèi)流進(jìn)入內(nèi)體，導(dǎo)致內(nèi)體膜脹破，從而將內(nèi)體內(nèi)包裹的物質(zhì)釋放，實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸[12]，如圖 2 所示。有研究表明，叔胺基團(tuán)能在酸性條件下吸附質(zhì)子，使物質(zhì)免受酸性環(huán)境的影響，同時(shí)其質(zhì)子化介導(dǎo)能力會(huì)增大內(nèi)體滲透壓，脹破內(nèi)體膜，將物質(zhì)從內(nèi)體中釋放出來(lái)[13]。另有研究表明，富含組氨酸的分子由于咪唑基的存在，具有很好的質(zhì)子介導(dǎo)作用，也會(huì)導(dǎo)致內(nèi)體膜的破裂[14]。

　　2. 2 通過(guò)膜的融合實(shí)現(xiàn)跨膜

　　另一種內(nèi)體逃逸機(jī)制是實(shí)現(xiàn)膜的融合，降低內(nèi)體膜的穩(wěn)定性[12]。對(duì)細(xì)胞而言，細(xì)胞膜由磷脂雙分子層構(gòu)成，膜內(nèi)是疏水環(huán)境，而膜兩側(cè)為水環(huán)境。而 α-螺旋類似于 DNA 雙螺旋，具有 NCCNCCNCC 骨架結(jié)構(gòu)，能夠?qū)⑹杷�基團(tuán)放在骨架外側(cè)，將親水基團(tuán)置于內(nèi)側(cè)，膜蛋白能夠以 α-螺旋實(shí)現(xiàn)單次或多次跨膜[15]。

　　2. 3 通過(guò)形成膜孔穿過(guò)內(nèi)體膜

　　通常，孔的形成是基于膜張力和線張力之間的相互作用( 圖 3) 。膜張力大形成孔，線張力大關(guān)閉孔。多肽的一些組件和孔的邊緣具有較高的親和力，故將多肽結(jié)合到聚合物表面可以減少線張力，從而增加孔的形成數(shù)量，保 持 孔 徑 的 穩(wěn) 定[16]。 如將陽(yáng)離子兩親性多肽 ( AMPs) 與脂質(zhì)雙分子層結(jié)合即會(huì)導(dǎo)致其內(nèi)部應(yīng)力和內(nèi)膜張力的增加，足夠使膜形成孔隙[17]。Kim 等[18]報(bào)道了一種細(xì)胞質(zhì)穿透抗體 TMab4，其在酸性環(huán)境下會(huì)發(fā)生構(gòu)象的變化，導(dǎo)致內(nèi)體膜孔的形成，從而實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸。為研究其內(nèi)體逃逸行為，用 TMab4 脈沖 Hela 細(xì)胞，隨后用不同內(nèi)體標(biāo)記物進(jìn)行染色，結(jié)果表明在內(nèi)吞 2 h 后， TMab4 出現(xiàn)在內(nèi)體中，在 6 h 后，逃逸到細(xì)胞質(zhì)中，實(shí)現(xiàn)逃逸。

　　2. 4 光化學(xué)內(nèi)化破壞內(nèi)體膜

　　利用光化學(xué)作用激活進(jìn)入細(xì)胞的光敏分子，產(chǎn)生活性氧( reactive oxygen species，ROS) ，破壞內(nèi)體膜的過(guò)程稱之為 光 化 學(xué) 內(nèi) 化 ( photochemical internalization，PCI) 。光敏分子通過(guò)附著、包載等方式進(jìn)入細(xì)胞，在光的照射下，釋放 ROS，使內(nèi)體膜氧化破裂，釋放 內(nèi) 容 物[19，20] ( 圖 4) 。Selbo 等[21] 將 光 敏 劑 TPCS2a ( 紅 色 熒 光) 與 Alexa-488( 綠色熒光) 標(biāo)記的 AC133 皂草素和 WiDr 細(xì)胞共孵育 18 h 后，觀察到熒光共定位于內(nèi)體中。曝光 1 h 后，在整個(gè)胞質(zhì)中均發(fā)現(xiàn)有彌散的熒光顯影，說(shuō)明 PCI 誘導(dǎo)的皂草素成功實(shí)現(xiàn)逃逸。

　　2. 5 免疫響應(yīng)的屏蔽

　　仿生粒子的引入，可以達(dá)到屏蔽免疫系統(tǒng)響應(yīng)的效果，實(shí)現(xiàn)免疫逃逸，同時(shí)使納米粒子具有生物特性，對(duì)特定組織、細(xì)胞具有靶向作用。Zhang 等[22] 從血液中分離出血小板，由于血小板外側(cè)膜為負(fù)電性，聚乳酸-羥基乙酸( poly( lactic-co-glycolic acid) ，PLGA) 納米粒子也為負(fù)電性，利用靜電排斥理論使體系構(gòu)成“right-side-out”結(jié)構(gòu)，血小板上的各種蛋白得以保留并朝向外側(cè)，使得最終的體系既有納米粒子載體特性，又有血小板活性。結(jié)果表明，血小板膜覆蓋的納米粒子，能有效結(jié)合人膠原蛋白，并對(duì)孤立血管的損傷區(qū)域具有靶向作用。

　　3 藥物載體為實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸的結(jié)構(gòu)修飾

　　3. 1 聚合物修飾

　　3. 1. 1 胺類聚合物

　　胺類聚合物如聚乙烯亞胺( polyethyleneimine，PEI) 、聚酰胺-胺、氯化銨及甲胺等，其結(jié)構(gòu)中含有大量的胺基，能夠吸附質(zhì)子，避免藥物受酸性環(huán)境影響，還能增大內(nèi)體內(nèi)滲透壓，使離子內(nèi)流，造成膜的脹破，實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸[23，24]。Behr 等[25] 首先提出將 PEI 作為“質(zhì)子海綿”，其緩沖能力在 pH7. 2 ～ 5. 0，他的研究小組假設(shè)這種聚合 物 可 以 通 過(guò) 滲 透 壓 失 衡 來(lái)破壞內(nèi)體。Borchard 等[26]將 PEI 加入到 PLGA 溶液，得到 PLGA-PEI 納米顆粒，對(duì)該納米顆粒負(fù)載 DNA 后其在細(xì)胞內(nèi)分布及表達(dá)進(jìn)行定位。用羅丹明標(biāo)記 DNA，6 h 后 DNA 進(jìn)入內(nèi)體，隨后一段時(shí)間在 Calu-3 細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到蛋白表達(dá)，表明納米顆粒逃離內(nèi)體。 Jiang 等[27]用富含胺的熒光碳納米粒子( FCNs) ，攜帶能夠減少 polo 樣激素( polo-like Kinase 1，Plk1) 表達(dá)的小干擾 RNA( siPlk1) ，制備得到帶有 Plk1 調(diào)節(jié)基因的碳納米粒子-基因復(fù)合物( C-siPlk1) ，用于癌癥治療。研究者用熒光染料 Cy5( 紅色熒光) 對(duì) C-siPlk1 進(jìn)行標(biāo)記，得到 C-Cy5 siPlk1; 在 37 ℃下將人類黑色素瘤 A375 細(xì)胞與 Lysotracker( 綠色熒光) 共孵育 2 h，熒光標(biāo)記內(nèi)體; 隨后將含 Lysotracker 探針的 A375 細(xì)胞與 C-Cy5 siPlk1 在 37 ℃ 下共孵育 1 h。通過(guò)激光掃描共聚焦顯微鏡( confocal laser scanning microscope，CLSM) 觀察發(fā)現(xiàn)，A375 細(xì)胞與 CCy5 siPlk1 共孵育后，細(xì)胞能夠?qū)?C-Cy5 siPlk1 持續(xù)攝取; 在 3～6 h 內(nèi)，發(fā)現(xiàn) Cy5 的紅色熒光與 Lysotracker 的綠色熒光共定位，表明 C-Cy5 siPlk1 被內(nèi)體攝取; 進(jìn)一步孵育 9 h 后，紅色熒光與綠色熒光逐漸分離，表明 CCy5 siPlk1 開(kāi)始內(nèi)體中成功逃逸，12 h 后，僅有少數(shù) CCy5 siPlk1 未從內(nèi)體逃逸( 圖 5) 。

　　PEI 作為目前藥物遞送研究最成功的聚陽(yáng)離子之一，能夠大大提高轉(zhuǎn)染效率，但其質(zhì)子化作用越強(qiáng)，其細(xì)胞毒性也隨著增大[28，29]。因此，研究者們通過(guò)在聚合物上引入聚乙二醇( PEG) 、聚氧胺等非離子親水基團(tuán)或直接添加陰離子來(lái)屏蔽陽(yáng)離子電荷，或通過(guò)交聯(lián)可降解基團(tuán)等，減少其對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的破 壞作用，降 低 細(xì) 胞 毒性[30]。Guan 等[31] 設(shè)計(jì)合成醛基修飾的 PEG，對(duì) PEI/ DNA 復(fù)合物的正電荷進(jìn)行屏蔽化; 復(fù)合物進(jìn)入微酸性腫瘤區(qū)，在席夫堿鍵的 pH 響應(yīng)下，PEG 脫落，發(fā)揮 PEI 的高效轉(zhuǎn)染作用。研究表明，在 pH 7. 4 條件下，PEI/ DNA 復(fù)合物的細(xì)胞存活率為 83. 2%，經(jīng)過(guò) PEG 屏蔽化后，細(xì)胞毒性明顯減輕。PEG 屏蔽化作用在提高穩(wěn)定性和實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)循環(huán)的同時(shí)，降低了 PEI 的細(xì)胞毒性。Wang 等[32]設(shè)計(jì)具有負(fù)電荷和疏水基團(tuán)的樹(shù)突狀 PEG 端粒大分子包封蛋白質(zhì)-PEI 復(fù)合物，最大限度減少聚陽(yáng)離子誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性，同時(shí)端粒分子屏蔽層在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)傳遞過(guò)程中能夠與納米復(fù)合物分離，恢復(fù)高轉(zhuǎn)染特性。另有研究者將陰離子聚合物硫酸葡聚糖( DS) 引入 PEI/DNA 復(fù)合物，得到粒徑 200 nm、分散系數(shù) 0. 2 的復(fù)合物微粒，隨著 DS 用量的增大，毒性降低[33]。

　　3. 1. 2 咪唑類聚合物

　　咪唑是分子結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)間位氮原子的五元芳雜環(huán)化合物。咪唑基在 pH 小于 6 時(shí)，會(huì)被質(zhì)子化[34]。由于內(nèi)體的內(nèi)環(huán)境 pH 較低，咪唑基團(tuán)具有很好的質(zhì)子化介導(dǎo)作用，促使“質(zhì)子海綿效應(yīng)”的發(fā)生。與胺類聚合物相比，聚組氨酸或聚咪唑類載體的轉(zhuǎn)染效率要更高，這可能與咪唑基能破壞內(nèi)體膜的融合活性有關(guān)[35]。 Zhang 等[36]合成了 mPEG-PLA-Phis 共聚物膠束，使用吖啶橙定位測(cè)定和鈣黃綠素?cái)z取研究共聚物對(duì)內(nèi)體膜的破壞作用。細(xì)胞核和內(nèi)體分別用 Hoechst33258( 藍(lán)色) 和 Lyso Tracker DND-26( 綠色) 標(biāo)記。負(fù)載阿霉素( DOX) 的基于 Phis 的共聚物膠束被 MCF-7 細(xì)胞快速吸收，并在 15 min 后封裝于內(nèi)體內(nèi)。隨孵化時(shí)間增加，在細(xì)胞中橙色熒光( Lyso Tracker 和 DOX 的重疊) 增強(qiáng)，表明膠束在內(nèi)體中聯(lián)系積累。4 h 后，發(fā)現(xiàn)強(qiáng)烈的紫色熒光( DOX 與 Hoechst 重疊) ，表明 DOX 從內(nèi)體逃逸到細(xì)胞核中。聚( 4-乙烯基咪唑) ( poly( 4-vinylimidazole) ，P4V) 分子結(jié)構(gòu)中含有大量咪唑環(huán)，在酸性條件下可接受質(zhì)子，具有“質(zhì)子海綿效應(yīng)”。Jong 等[37] 研究了 P4V 作為非病毒基因遞送載體，研究表明，P4V 結(jié)合 DNA 在進(jìn)入內(nèi)體的酸性環(huán)境后會(huì)發(fā)生電荷的反轉(zhuǎn)，發(fā)生質(zhì)子化作用，與 PEI 作用機(jī)理類似，可實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸。

　　3. 2 多肽的融合

　　部分兩性分子多肽中含有酸性氨基酸，如谷氨酸，其帶有負(fù)電荷的羧基在中性條件下破壞多肽的 α-螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，而在酸性環(huán)境中，促進(jìn)親水親油的兩性螺旋結(jié)構(gòu)的形成，通過(guò)與內(nèi)體內(nèi)膜的融合破壞內(nèi)體。攜帶此種多肽序列的載體具有很強(qiáng)的內(nèi)體逃逸能力[38]。蜂毒肽、聚精氨酸等堿性多肽能夠在酸性環(huán)境中形成 α-螺旋，此類構(gòu)象的轉(zhuǎn)變能夠提高多肽與膜結(jié)構(gòu)的親和性。目前 用 于 加 強(qiáng) 載 體 內(nèi) 體 逃 逸 能 力 的 多 肽 有 蜂 毒 肽、 KALA、GALA[39-41]等。 Yeom 等[42] 將 KALA 多肽與 PEG 綴合以防止 PEIDNA 復(fù)合物自聚集，通過(guò)該配方得到穩(wěn)定的 PEI/KALAPEG 復(fù)合物。以 PEI 為參照，通過(guò)熒光素標(biāo)記的寡核苷酸和 C3 細(xì)胞中的 Cy3 標(biāo)記的質(zhì)粒 DNA，研究了 PEI/ KALA 的內(nèi)體逃逸能力，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染 24 h 后，使用 PEI/KALA 的一組，細(xì)胞內(nèi)的熒光復(fù)合物明顯高于 PEI，且熒光染色是在核內(nèi)而非核外。這表明，KALA 的加入明顯增強(qiáng) PEI 的質(zhì)子化介導(dǎo)作用，增強(qiáng)載體內(nèi)體逃逸能力。 Yu 及其研究小組[43] 得到二硫鍵修飾的富含樹(shù)枝狀精氨酸的陽(yáng)離子肽。基因復(fù)合物可用熒光染料 Cy5 標(biāo)記，熒光照射下顯紅色，而酸性內(nèi)體可被 LysoSensor Yellow/ Blue DND-160 染成綠色。研究表明( 圖 6) ，與 PEI 相比，脂質(zhì)-基因復(fù)合物組( RLS 及 RL) 在轉(zhuǎn)染 2 h，熒光即顯色為黃色熒光( 紅色與綠色疊加) ，表明進(jìn)入內(nèi)體環(huán)境; 在轉(zhuǎn)染 4 h 時(shí)，PEI 組出現(xiàn)黃色熒光斑點(diǎn)，表明 PEI 組也被內(nèi)體吞噬，而此時(shí)的脂質(zhì)-基因復(fù)合物組的有些熒光已經(jīng)開(kāi)始變?yōu)槌壬�或紅色，這表明紅色熒光量增加，證明更多的基因復(fù)合物逃離了內(nèi)體環(huán)境，同時(shí)也表明，精氨酸多肽的逃逸效率較 PEI 明顯增加。 Kalina 等[44]設(shè)計(jì)了 pH 觸發(fā)的成孔肽，他們從 pH 不敏感的成孔肽 MelP5 序列的 18 432 個(gè)組合文庫(kù)中進(jìn)行高通量篩選，確定了兩性螺旋極性表面的 5 個(gè)氨基酸殘基，其在 pH= 7 處為帶電、可溶狀態(tài)，在 pH= 5 下與膜結(jié)合，螺旋成孔，實(shí)現(xiàn)了內(nèi)體逃逸。

　　3. 3 添加光化學(xué)誘導(dǎo)劑

　　采用光化學(xué)方法，使生物載體從內(nèi)體通路釋放到包漿的 手 段，現(xiàn)已被廣泛研究[45]。許 多 光 敏 劑，包 括 TPPS4、TPPS2a、AIPcS2a和基于樹(shù)枝狀大分子的光敏劑 ( DP) 主要定位在內(nèi)體的膜表面，暴露于光下后，這些光敏劑會(huì)引起 ROS 的形成，短時(shí)間內(nèi)破壞內(nèi)體膜，而細(xì)胞內(nèi)容物仍能保持完整并被遞送至細(xì)胞質(zhì)中[7，46]。 Yuan 等[47]報(bào)道了具有聚集誘導(dǎo)發(fā)射( AIE) 特征的光敏劑( PS) 與胺基丙烯酸酯( AA) 結(jié)合在光存在下，會(huì)產(chǎn)生 ROS。通過(guò)共焦激光掃描電鏡評(píng)估復(fù)合物的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)特征，用吖啶橙為指標(biāo)對(duì) ROS 誘導(dǎo)的內(nèi)體損壞進(jìn)行評(píng)價(jià)，研究表明，Hela 細(xì)胞在沒(méi)有 ROS 參與下，呈紅色熒光( 內(nèi)體) 和綠色熒光( 細(xì)胞器細(xì)胞核) ，而將其置于光照射下，紅色熒光顯著降低，表明內(nèi)體被破壞，在細(xì)胞質(zhì)中檢測(cè)到 YOYO-1 標(biāo)記的 DNA，實(shí)現(xiàn)了內(nèi)體逃逸( 圖 7) 。

　　Kun 等[48]也報(bào)道了負(fù)載 DOX 和光誘導(dǎo)劑的聚合物膠束( D-LRPM) ，用熒光分別標(biāo)記內(nèi)體和細(xì)胞核，有光照射下內(nèi)體熒光強(qiáng)度較無(wú)光照射明顯降低，且 DOX 在細(xì)胞核處的熒光強(qiáng)度增加，結(jié)果表明，D-LRPM 中光誘導(dǎo)劑產(chǎn)生的 ROS 能夠成功破壞內(nèi)體膜，將包載物釋放至細(xì)胞質(zhì)中。在研究過(guò)程中，PCI 技術(shù)僅通過(guò)光強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié)，無(wú)光區(qū)域不會(huì)受到損失，進(jìn)一步降低風(fēng)險(xiǎn)，是一種有效可控的逃逸方式[20]。

　　3. 4 pH 敏感材料的結(jié)合

　　pH 敏感型材料是一類能夠響應(yīng)所在環(huán)境 pH 值的微小變化，其分子結(jié)構(gòu)和物理性能發(fā)生一定變化的新型材料。在機(jī)體病變細(xì)胞，以腫瘤細(xì)胞為例，腫瘤微環(huán)境具有低 O2、pH 降低、間質(zhì)高壓、血管高滲透性等特點(diǎn)，生理狀態(tài)下，正常組織細(xì)胞外 pH 介于 7. 2～7. 4，而惡性腫瘤細(xì)胞外 pH 介于 6. 5 ～ 6. 9 之間[49]。通過(guò)在藥物載體上引入 pH 敏感型材料，使其僅在靶點(diǎn)特定 pH 條件下完成藥物釋放，既實(shí)現(xiàn)了內(nèi)體逃逸，又能使藥物在靶點(diǎn)處有效釋放。ZnO 納米顆粒在生理?xiàng)l件下( pH 7. 4) 保持良好的穩(wěn)定性，但在 pH 5～6 左右能夠快速分解[50]。Zhang 等[51]利 用 這 一 特 性，合 成 具 有 pH 敏 感 特 性 的 ZnOMSNs，達(dá)到內(nèi)體逃逸效果，實(shí)現(xiàn)藥物釋放的可控性。Ma 等[52]將半乳糖、葡聚糖與視黃醛進(jìn)行綴合，得到 GDR綴合物，分別研究了 pH 為 5. 0，6. 5 和 7 的 PBS 緩沖液中 GDR 納米凝膠的流體動(dòng)力學(xué)尺寸。研究表明，其在 pH= 7. 4 下，粒徑保持不變; 在 pH = 6. 5 下，粒徑有所增加; 在 pH= 5. 0 時(shí)，粒徑增大為中性條件下的 3 倍，具有明顯的 pH 敏感效應(yīng)。通過(guò)熒光標(biāo)記示蹤可知，孵育 6 h 后，包載疫苗的 GDR 與內(nèi)體共定位，并觀察到有超過(guò) 50%的內(nèi)含物從內(nèi)體中解離出來(lái)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸。研究推測(cè)，腙鍵的裂解消耗大量質(zhì)子，從而增加了質(zhì)子、氯離子和水的流入，從而引起內(nèi)體溶脹和損傷。

　　3. 5 脂質(zhì)材料

　　二油酰磷脂酰乙醇胺( DOPE) 及其衍生物在環(huán)境中會(huì)發(fā)生相變，繼而破壞內(nèi)體膜，相關(guān)研究表明，磷脂酰乙醇胺連接不同種類的不飽和脂肪烴鏈在生理?xiàng)l件下為負(fù)電性，復(fù)合物表現(xiàn)為層狀，在 pH 下降時(shí)，PE 質(zhì)子化使得復(fù)合物變?yōu)榱�角形[53]。六角形的復(fù)合物對(duì)膜具有較大的破壞性，能完成內(nèi)體逃逸。Safinya 課題組[54]使用小角度 X 射線散射加速器將二油酰三甲基銨丙烷( DOTAP) - 二油酰磷脂酰乙醇胺( DOPE) 的結(jié)構(gòu)與其轉(zhuǎn)染效率相關(guān)聯(lián)，DOPE 被發(fā)現(xiàn)可以誘導(dǎo) DNA-脂質(zhì)復(fù)合物從多層結(jié)構(gòu)向個(gè)倒六角液晶相的轉(zhuǎn)變。反向六邊形結(jié)構(gòu)能夠促進(jìn)與陰離子膜之間的相互作用，導(dǎo)致膜融合和 DNA 釋放。

　　4 結(jié) 語(yǔ)

　　近年來(lái)，一系列具有良好的生物相容性、組織滲透性、高靶向性、無(wú)毒、易吸收的納米載體得到了廣泛的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，但內(nèi)體屏障的存在也限制了納米藥物的發(fā)展。目前，通過(guò)膜融合或形成膜孔的形式實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸的多肽、蛋白類材料逃逸效率高但具有一定免疫原性; 而聚合物類逃逸材料在胞內(nèi)仍存在一定毒性; 利用仿生粒子實(shí)現(xiàn)免疫逃逸，一定程度避免免疫原性，又無(wú)細(xì)胞毒性，但其不具有普遍作用性，仍難以得到實(shí)際應(yīng)用。在現(xiàn)有載體材料基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)內(nèi)體逃逸機(jī)制的進(jìn)一步了解，將會(huì)推動(dòng)藥物載體的發(fā)展和應(yīng)用。相信隨著對(duì)藥物載體在胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝及內(nèi)體免疫等機(jī)理的進(jìn)一步揭示及新型藥物載體的開(kāi)發(fā)，內(nèi)體逃逸劑將會(huì)有更為廣闊的發(fā)展空間。

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　　納米藥物載體的結(jié)構(gòu)修飾實(shí)現(xiàn)內(nèi)體逃逸相關(guān)論文期刊你還可以了解：《中國(guó)藥物與臨床雜志2018年06期投稿論文目錄查詢》