中國預防獸醫學報最新期刊目錄

細菌莢膜多糖的生物學功能及抗宿主細胞吞噬作用機制的研究進展————作者：龍金桃;冶貴生;

摘要：<正>莢膜是以多糖聚合物為主要成分，存在于某些細菌表面的一種特殊結構，包裹在細菌外表面的一層松散的粘液物質，是細菌表面的主要特征^[1]。因其主要組分是多糖，在致病菌中又稱莢膜多糖。由于直接覆蓋在細菌外部，莢膜對細菌起著一定的保護作用，同時在細菌的黏附性以及病原菌致病性等方面有重要影響^[2]

豬源芽孢桿菌的篩選、體外益生特性及安全性評估研究————作者：劉瑩;范京惠;顧文源;趙云環;張帥;左玉柱;

摘要：為篩選具有潛在益生特性的動物源益生菌并評估其作為抗生素替代品的可能性，本研究從健康豬糞便中分離并純化益生菌，采用菌落形態觀察、革蘭氏染色、16S rRNA基因擴增及測序的方法并利用鄰接法構建系統進化樹，對分離菌株進行種屬鑒定。采用牛津杯法、K-B紙片擴散法檢測分離菌株的抑菌活性及抗生素耐藥性，并對其耐受性及安全性進行評估。結果顯示，樣品通過加熱殺滅非芽孢菌后涂布TSA培養基分離培養得到44株芽孢桿...

豬源牛病毒性腹瀉病毒FQ株的分離鑒定及其致病性————作者：徐磊;曾亮明;張體銀;陶潔;廖惠珍;林祚貴;魏梅蕊;吳宏正;王育順;朱國強;黃瑜;

摘要：為了解致豬腹瀉的病原及其分子特征、致病性，本研究基于疑似豬瘟仔豬病料樣品進行病毒的MDBK細胞分離培養、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）RT-qPCR與IFA檢測、5'-UTR和E0基因擴增測序與遺傳進化分析，在分離病毒細胞培養物純凈性檢測后將其以肌肉注射和滴鼻方式接種實驗組仔豬，采用流式細胞術、RT-qPCR、ELISA分別檢測感染豬淋巴細胞數量、外周血和主要臟器中BVDV 5'-UTR基因轉錄、抗...

豬偽狂犬病病毒gE蛋白單克隆抗體的制備、表位鑒定及初步應用————作者：俞機敏;劉宏揚;劉云飛;王尚輝;宋厚輝;張朝霞;翁長江;

摘要：為了制備豬偽狂犬病病毒（PRV）g E糖蛋白的單克隆抗體（MAb），本研究將PRV JM株gE蛋白主要抗原表位區段（aa52～aa238）的基因序列構建重組表達質粒pET-32a-gE，經原核表達及純化重組蛋白，并免疫BALB/c小鼠。取3次免疫小鼠脾臟制備脾細胞，與小鼠骨髓瘤細胞（SP2/0）細胞融合。通過ELISA篩選雜交瘤細胞株，western blot和間接免疫熒光試驗（IFA）鑒定MAb...

湖南省腹瀉牛中新型牛腸道病毒變異株的分離與鑒定————作者：張貽帥;張慧慧;廖晶瑩;湯慧;施音;侯佳瑤;肖朝庭;

摘要：為分離鑒定湖南省牛養殖場腹瀉牛致病病原，并分析其分子生物學特征，本研究將采集的牛肛拭子樣品處理后用Vero細胞系分離和噬斑純化后，采用隨機引物擴增后經高通量測序獲得2株牛腸道病毒（BEV）病毒（WG-X4和NKY-2-1）。參照測序結果，采用Premier 6.0軟件設計BEV分段擴增引物擴增出2株BEV的全基因組片段測序，經序列拼接后成功獲得2株病毒的基因組全長。全基因組比較分析結果顯示WG-X...

基于大片形吸蟲NAT13蛋白的間接ELISA檢測方法的建立————作者：鄒予;吳東琪;黎宏嘉;陳進喜;咸承俊;趙敏;陳琬婷;王冬英;

摘要：為了基于大片形吸蟲NAT13蛋白（rFgNAT13）建立用于檢測和評估大片形吸蟲感染的間接ELISA方法，本研究應用原核系統表達r FgNAT13，通過SDS-PAGE和western blot鑒定其表達形式和反應原性，結果顯示在28 ku處出現目的條帶，主要以可溶性形式表達；r FgNAT13具有較強的反應原性。以rFgNAT13作為包被抗原建立間接ELISA方法，通過棋盤法優化反應條件，結果顯...

牛分枝桿菌PE＿PGRS21蛋白抑制細胞自噬的研究————作者：楊楊;陳標;徐阿慧;黃蓓;宋厚輝;臧鑫鑫;

摘要：自噬是細胞用來清除受損細胞器、生物大分子以及胞內病原微生物的一種重要方式。為了探究牛分枝桿菌PE＿PGRS21蛋白對細胞自噬的影響，本研究采用同源重組的方法構建真核表達質粒pFlag-PE＿PGRS21，經PCR和測序驗證正確后，與重組質粒pEGFP-LC3共同轉染HeLa細胞，采用western blot的方法檢測自噬相關蛋白LC3-II的表達。結果顯示，PE＿PGRS21能夠顯著抑制HeLa細...

糞腸球菌致羔羊腦膜炎感染模型的構建————作者：吳憂;魏勇;趙鵬飛;焦隴玲;周明;張潤澤;李永健;齊亞銀;任靜靜;

摘要：為探究致腦膜炎糞腸球菌（E.faecalis）對羔羊的致病性并構建該菌的感染模型，本試驗將兩株致腦膜炎糞腸球菌（XJ-1、XJ-6）分別感染小鼠，統計死亡率，經寇氏改良法計算小鼠的半數致死量(LD₅₀)，篩選出糞腸球菌強毒株，采用頸靜脈接種的方式感染1月齡羔羊，建立糞腸球菌致羔羊腦膜炎感染模型，觀察感染后羔羊臨床癥狀，采集腦組織制備病理切片，并對腦組織的細菌進行分離鑒定，取腦...

Fur家族轉錄因子Lmo1956在單核細胞增生李斯特菌環境應激及生物被膜形成中的調控作用研究————作者：常意行;左雨霏;錢億寬;李能秀;焦健;才學鵬;孟慶玲;喬軍;

摘要：單核細胞增生李斯特菌（LM）是一種重要的人獸共患革蘭氏陽性菌，對外界環境具有廣泛適應性。為了探究鐵攝取調節蛋白（Fur）家族轉錄因子Lmo1956的生物學功能，本研究以提取的LM EGD-e株基因組為模板，PCR擴增lmo1956基因并通過在線軟件分析Lmo1956蛋白的結構域特征；利用同源重組技術構建lmo1956基因缺失株LM-Δlmo1956及回補株LM-CΔlmo1956，采用特異性引物經...

羅氏沼蝦源弗氏檸檬酸桿菌的分離鑒定及致病性分析————作者：趙夢瑤;陳靜;姚嘉赟;袁雪梅;黃雷;彭先啟;張海琪;

摘要：為探究患病羅氏沼蝦的病原及其感染的防治措施，本研究從浙江省某養殖場采集10只患病羅氏沼蝦的肝胰腺、鰓及肌肉樣品分離獲得一株優勢菌。通過對該優勢菌經革蘭氏染色鏡檢及生化鑒定，結果表明分離菌為弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）。采用PCR分別擴增分離菌的16S r RNA和gyr B基因序列，測序后經BLAST檢索與這兩種基因同源性均最高的菌株；通過MEGA 7.0軟件中的Cl...

一株H5N6亞型高致病性禽流感病毒的遺傳演化及生物學特性研究————作者：趙志國;田井滿;李明慧;白曉利;宋興棟;李雁冰;陳化蘭;

摘要：2023年5月本實驗室從家禽的監測樣品中分離到一株H5N6亞型高致病性禽流感病毒（HPAIV），命名為A/chicken/Jiangsu/S1/2023（H5N6）株，簡稱CK/JS/S1/2023（H5N6）株。為進一步了解該病毒的生物學特性，本研究對其進行全基因組的分段PCR擴增與測序分析各基因節段編碼的關鍵氨基酸位點及各基因節段的遺傳演化分析，采用Simplot軟件分析該病毒全基因組的重配事...

4型鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定及其不同感染途徑致病性和傳播方式的研究————作者：沈揚揚;馬芹;汪建華;褚新星;馬元元;張曉宇;劉子涵;魏書強;于堃;石艷紅;盧博敏;郭明;高月花;李玉峰;

摘要：為研究4型鴨疫里默氏桿菌（RA-4）對商品肉鴨的致病性及傳播規律，本實驗對疑似感染RA的病死鴨肝臟、腦組織進行細菌的分離培養與純化，并進行生化試驗、血清型鑒定，16S r RNA的PCR擴增及測序，采用K-B紙片法檢測其藥敏性。結果顯示分離到1株RA-4，該分離株符合RA的生化特征；PCR擴增及測序分析該分離株與RA16S r RNA基因的同源性在99.04%～99.47%；該分離株對恩諾沙星、多...

鴨源海豚葡萄球菌A亞群的分離鑒定及藥物敏感性分析————作者：舒靜超;張菡;徐錢錢;張雨樂;趙盼盼;晉雅靜;和小娥;彭志鋒;

摘要：為研究鴨源海豚葡萄球菌（S. delphini）的生物學特征、藥物敏感性及致病性，本研究從病鴨肝臟中通過分離純化、革蘭染色鏡檢、基質輔助激光解析電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）鑒定、16S r RNA基因的PCR擴增與測序等方法進行細菌的分離鑒定；通過多重PCR鑒定分離菌株的亞群；分別通過k-B紙片法和雛鴨感染試驗分析分離菌株的耐藥性和致病性。結果顯示，從患病鴨肝臟分離到產生β-溶血環...

豬非典型瘟病毒、經典豬瘟病毒、日本乙型腦炎病毒的三重熒光定量PCR檢測方法的建立與應用————作者：許浩文;陳軍光;馬瓊瓊;潘杏明;郭美君;朱偉群;周瑩珊;董婉玉;王曉杜;

摘要：豬非典型瘟病毒（APPV）、經典豬瘟病毒（CSFV）、日本乙型腦炎病毒（JEV）均屬于黃病毒科重要成員，從臨床癥狀難以區分且三者的混合感染。為建立一種能快速鑒別檢測APPV、CSFV、JEV的三重熒光定量PCR(qPCR）檢測方法，本研究根據APPV 5'UTR基因、CSFV E2基因和JEV E基因分別設計引物與探針，將公司合成的重組質粒標準品pLKO.1-APPV-5'UTR、pLKO.1-C...

禽腺病毒I群和禽腺病毒4型雙重TaqMan探針熒光定量PCR檢測方法的建立與應用————作者：薛曉巖;張振興;楊欽鴻;王位;張偉;李素華;宋建領;

摘要：為建立能快速檢測禽腺病毒I群（FAd V-I）和禽腺病毒4型（FAd V-4）的雙重Taq Man探針熒光定量PCR（qPCR）方法，本研究根據禽腺病毒（FAd V）的Hexon基因，設計針對FAd V-I和FAd V-4的通用型與特異型引物與探針。采用上述引物經PCR擴增靶基因并克隆至p MD19-T載體中，構建重組質粒標準品p MD19-T-FAd V-I和p MD19-T-FAd V-4，并...

豬瘟與口蹄疫二聯疫苗的制備及其免疫效果評價————作者：高潔;袁紅;焦云娟;李坤;李平花;楊宇軒;黃書倫;郭海洋;邱酉飛;包慧芳;孫普;李冬;劉在新;盧曾軍;白興文;

摘要：為研制豬瘟（CSF）與口蹄疫（FMD）二聯疫苗并評價其免疫效果，本研究采用真核表達系統瞬時表達豬瘟病毒（CSFV）E2蛋白后經AKTA蛋白純化儀和Hi Trap TALON純化柱純化，采用SDS-PAGE檢測重組E2蛋白（r E2）的表達與純化效果，采用western blot檢測r E2與His-Tag單克隆抗體（MAb）的反應原性。結果顯示，在約50 ku處出現目的蛋白條帶，純化后在約50 k...

豬瘟病毒E2蛋白單克隆抗體的制備及抗原表位的鑒定————作者：林琪虹;李長堯;張朝霞;宋厚輝;翁長江;

摘要：為制備豬瘟病毒（CSFV）鼠源E2蛋白單克隆抗體（MAb）并鑒定其抗原表位，本研究通過昆蟲細胞桿狀病毒表達系統表達并純化了重組E2蛋白（rE2），將其免疫BALB/c小鼠后通過間接ELISA方法篩選到1株能夠穩定分泌E2蛋白MAb的雜交瘤細胞株3D5。經MAb亞類鑒定試劑盒檢測結果顯示3D5 MAb為IgM型。采用western blot檢測制備的3D5 MAb與293T細胞中過表達的E2蛋白及C...

馬源白介素受體拮抗因子的表達及其體外抗炎機制的研究————作者：李柄霖;李佳欣;郭興;林躍智;王曉鈞;

摘要：白介素受體拮抗因子（IL-1Ra）是細胞因子IL-1家族的主要成員，也是一種重要的抗炎因子。為評估馬源IL-1Ra在馬屬動物中的抗炎潛力，本研究構建原核表達質粒p GEX-6p-1-IL-1Ra，經測序鑒定正確后轉化大腸桿菌BL21(DE3)，于不同溫度下經IPTG誘導表達后，利用GST標簽蛋白純化試劑盒純化后通過SDS-PAGE檢測重組IL-1Ra蛋白（rIL-1Ra）的表達及純化效果。結果顯示...

河北地區羊泰勒蟲的分子流行病學調查————作者：陳麗鳳;鄒亞學;王秋悅;吳晨雨;董亞如;張華英;

摘要：為了解我國河北省部分地區羊泰勒蟲的種類、感染率、遺傳進化及季節流行性，并分析飼養草場環境及羊攜帶的蜱蟲對羊泰勒蟲感染的影響，本研究基于羊泰勒蟲18S rRNA基因，采用套式PCR法對河北省7個地級市的羊群采集的626份血液樣品感染蟲種進行種類鑒別；選取4份代表性泰勒蟲陽性樣品進行18S rRNA基因序列的同源性分析，構建系統進化樹分析其遺傳進化特征。結果顯示，我國河北省羊群泰勒蟲感染率為38.8%...

雞源細菌性腹瀉病原多重PCR檢測方法的建立和應用————作者：王旭濤;劉康平;崔亞男;姜朋欣;崔佳美;侯紫娟;陳寧;李茜;李妍;

摘要：為建立一種可同時檢測大腸桿菌O1、O2、O78和腸炎、鼠傷寒及雞白痢沙門菌的多重PCR方法，本研究分別針對大腸桿菌O1 wxz、O2 wxz、O78 wxz基因、腸炎沙門菌prot6E基因、鼠傷寒沙門菌STM4495基因、雞白痢沙門菌ipaJ基因設計引物，以上述6種菌DNA的等體積混合物作為模板，分別對6對引物的退火溫度、濃度進行優化，初步建立了檢測上述細菌的多重PCR檢測方法。優化結果顯示，多重...

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