蛋白質(zhì)屬于生物大分子，生命現(xiàn)象以此為物質(zhì)基礎(chǔ)。在血漿中血清白蛋白含量最為豐富，屬于擁有重要地位的載體蛋白[1]。當(dāng)前臨床藥理學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)獲得快速發(fā)展，也有諸多學(xué)者開始對(duì)藥物-蛋白質(zhì)會(huì)如何影響藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究。二者結(jié)合后，留在血漿中的藥物會(huì)對(duì)藥物作用進(jìn)行削弱，避免出現(xiàn)波動(dòng)現(xiàn)象，同時(shí)可增加藥物作用時(shí)間。阿司匹林可用于諸多疾病的治療中，具有優(yōu)良的止痛、消炎以及退熱功效[2]。本文主要使用熒光光度法，對(duì)在特定pH環(huán)境下阿司匹林與 HSA(人血清白蛋白)會(huì)如何相互作用進(jìn)行研究，現(xiàn)分述如下。

　　摘要：目的 ：探討阿司匹林與人血清白蛋白的相互作用。方法： 主要采用熒光光譜法，對(duì)二者之間的相互作用進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)探討二者之間的主要作用力。結(jié)果： 阿司匹林與人血清白蛋白存在猝滅效應(yīng)，且具有靜態(tài)性;同時(shí)范德華力為阿司匹林與人血清白蛋白的主要作用力。結(jié)論：阿司匹林與人血清白蛋白主要通過范德華力結(jié)合，因此阿司匹林一旦進(jìn)入人體內(nèi)部會(huì)有較快的代謝速度，此外，二者結(jié)合后會(huì)改變蛋白質(zhì)構(gòu)象。

　　關(guān)鍵詞：醫(yī)學(xué)論文發(fā)表,阿司匹林,人血清白蛋白,相互作用

　　1 材料與方法

　　1.1 一般材料

　　主要藥品為阿司匹林對(duì)照品、人血清白蛋白以及色氨酸對(duì)照品，試劑則主要使用分析純。選用熒光分光光度計(jì)(型號(hào)為CRT-9700，產(chǎn)自上海第三光學(xué))和酸度計(jì)(型號(hào)為Phs-3C，產(chǎn)自上海雷磁)以及超純水系統(tǒng)(型號(hào)為PWUV，產(chǎn)自力康生物)。

　　1.2 一般方法

　　1.2.1 溶液制備方法 在制備阿司匹林溶液時(shí)，首先稱取0.1125g的阿司匹林，而后在其中添加硼砂緩沖溶液，pH值為9.18，且其中含有KCL，劑量約為0.01mol・ L-1，在溶解后將其放入量瓶中，容量為25ml即可，而后定容，濃度為2.5×10-2mol・L-1。制備人血清白蛋白溶液時(shí)，選用0.0691g的人血清白蛋白，同樣加入硼砂緩沖溶液，pH值為9.18，且其中含有KCL，劑量約為0.01mol・L-1，溶解后定容至10ml的量瓶中。而后制備色氨酸溶液，稱取0.1062g的色氨酸定容至量瓶中，容量為50ml。而后精密稱取25μl并將其轉(zhuǎn)移至25ml容器中，溶解后便會(huì)得到色氨酸溶液，濃度為1.041 mol・L-1。

　　1.2.2 測(cè)定法 將濃度為4.0×10-5mol・L-1、劑量為2ml的人血清白蛋白溶液放至石英比色池中，容量為1cm，而后再在其中添加阿司匹林溶液，劑量為 16μl，濃度2.5×10-2mol・L-1，在添加時(shí)主要使用微量注射器，而后再開展熒光測(cè)定。每次混入溶液后均使其均勻，而后分別放置于25℃與 37℃的環(huán)境中，放置5min，直到平衡結(jié)合后將激發(fā)波長設(shè)定為282mm，再使用熒光分光光度計(jì)對(duì)波長范圍在300nm至500nm之間的發(fā)射光譜予以準(zhǔn)確記錄。

　　2 結(jié)果

　　2.1 人血清白蛋白溶液發(fā)色圖位置 蛋白質(zhì)內(nèi)源性熒光發(fā)色圖主要構(gòu)成為Tyr(酪氨酸)、Phe(苯丙氨酸)以及Try(色氨酸)等殘基，上述殘基各具特征熒光光譜。若測(cè)定條件為 Eex=280mm，則人血清白蛋白一旦出現(xiàn)內(nèi)源發(fā)光主要貢獻(xiàn)為色氨酸。分別測(cè)定人血清白蛋白與色氨酸后發(fā)現(xiàn)，兩者Eex分別為330mm與350mm。

　　2.2 熒光給體-受體間存在能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象 阿司匹林混合于人血清白蛋白后，測(cè)定其熒光光譜發(fā)現(xiàn)一旦添加藥物會(huì)降低人血清白蛋白熒光強(qiáng)度，這代表二者可相互作用，并且會(huì)產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移。但是人血清白蛋白不能增強(qiáng)阿司匹林熒光度，這代表二者之間雖然存在能量轉(zhuǎn)移，但是為非輻射性。

　　2.3 阿司匹林與人血清白蛋白之間存在的猝滅效應(yīng) 在人血清白蛋白溶液中滴入阿司匹林溶液時(shí)，前者熒光在335mm處會(huì)被猝滅，但是在403mm處又會(huì)產(chǎn)生一個(gè)發(fā)射峰。而通過研究后發(fā)現(xiàn)熒光猝滅并非受到動(dòng)態(tài)碰撞的影響。

　　2.4 阿司匹林與人血清白蛋白的作用力 生物大分子與藥物之間存在作用力，例如靜電引力、范德華力、氫鍵以及疏水作用力等。由于藥物不一樣，當(dāng)其與蛋白質(zhì)產(chǎn)生作用時(shí)也不會(huì)產(chǎn)生同樣的類型。通過研究后發(fā)現(xiàn)，范德華力為阿司匹林與人血清白蛋白的主要作用力。

　　3 討論

　　藥物與蛋白質(zhì)的相互作用是研究生命現(xiàn)象和物質(zhì)作用機(jī)理的一個(gè)基本問題，已經(jīng)引起了各國科學(xué)家的普遍重視。隨著高科技含量儀器的出現(xiàn)，研究藥物與蛋白質(zhì) 的方法不斷推陳出新，研究內(nèi)容、研究手段等不斷深入和完善，將會(huì)有數(shù)量越來越多、 成果越來越明顯、信息越來越全面的科研報(bào)道涌現(xiàn)出來。藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合程度直接影響到藥物儲(chǔ)存于血漿中的含量，從而決定了 藥物的最大作用強(qiáng)度和作用時(shí)間。生物體內(nèi)，藥物與蛋白質(zhì)的相互作用可能會(huì)受到食物 或醫(yī)藥制劑中的其它物質(zhì)成分的影響， 單純針對(duì)小分子配體與蛋白質(zhì)二元體系開展研究 具有一定的局限性。實(shí)驗(yàn)研究主要采用熒光光譜法，對(duì)阿司匹林與人血清白蛋白二者之間的相互作用進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)探討二者之間的主要作用力，對(duì)臨床上用藥劑量的控制及了解藥物的代謝過程具有重要的意義。通過使用熒光光譜對(duì)人血清白蛋白與色氨酸溶液進(jìn)行測(cè)定后若發(fā)現(xiàn)二者存在相同的最大吸收光譜，說明人血清白蛋白熒光發(fā)色圖的主要貢獻(xiàn)為色氨酸;反之若不同，則代表在蛋白質(zhì)疏水腔中可能存在色氨酸殘基。在阿司匹林中存在水楊酸羧基，引導(dǎo)乙酰基團(tuán)進(jìn)入其中會(huì)使得苯環(huán)之間相互連接而后在共軛作用下均勻分布電荷，為藥物進(jìn)入疏水腔中創(chuàng)造了條件，而后藥物與人血清白蛋白進(jìn)行進(jìn)一步結(jié)合，產(chǎn)生結(jié)合體后會(huì)對(duì)溶液中人血清白蛋白的構(gòu)象進(jìn)行改變。這說明蛋白質(zhì)存在多種構(gòu)象或者變構(gòu)，且密切關(guān)聯(lián)于微環(huán)境[3]。

　　在本研究中發(fā)現(xiàn)人血清白蛋白出現(xiàn)猝滅效應(yīng)主要是因?yàn)橐阴Ｋ畻钏�，同時(shí)猝滅具有靜態(tài)性，受到化合物形成的影響。通過研究人血清白蛋白與阿司匹林的熱力學(xué)參數(shù)后發(fā)現(xiàn)二者之間的作用力主要為范德華力。此外，還發(fā)現(xiàn)若人血清白蛋白中沒有藥物則其熒光強(qiáng)度要高于有藥物的人血清白蛋白熒光強(qiáng)度，這說明乙酰水楊酸與存在于人血清白蛋白中的色氨酸殘基之間有能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，只是為非輻射性[4]。

　　藥物結(jié)合于血漿蛋白可對(duì)藥物分布與作用起重要影響。二者相互結(jié)合后存在較大的D-H分子量，無法開展代謝活動(dòng)，若藥物有較高的HSA結(jié)合率則在人體內(nèi)具有極其緩慢的消除速度，可延長其存在時(shí)間。范德華力作為一種引力具有非特異性，主要由存在于分子中的原子通過振動(dòng)后在相互靠近的過程中引發(fā)的極化作用，繼而產(chǎn)生瞬息偶極吸引力。當(dāng)兩個(gè)原子相距約50nm才會(huì)產(chǎn)生范德華力。范德華相較于共價(jià)鍵長而言，前者半徑更長，因此藥物在與人血清白蛋白結(jié)合時(shí)若主要通過范德華力則具有易解離性，作用不會(huì)持久，因此阿司匹林在人體內(nèi)部具有較快的代謝速度。

　　參考文獻(xiàn)：

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